FDA关于戊酸雌二醇片的BE指南
而对于生物等效性评价，准确定量血药浓度是至关重要的。分析方法的难点
难点1内源性化合物定量分析
雌二醇为内源性物质，无法使用常规空白基质配制标准曲线进行准确定量分析，一般采用替代基质法。做方法验证时需有替代基质和真实基质的质控样品，同时需要做平行性实验，平行性实验通过才证明替代基质的可行性。
表1人血浆中雌激素浓度参考范围
难点2酶解条件与葡萄糖醛酸和硫酸结合是人体内类固醇代谢的一个主要途径。因此生物基质中的类固醇都以结合态和非结合态两种形式存在。由于缺乏类固醇结合物的标准对照品，通常采用酶解的方式间接的对类固醇结合物进行定量分析。不同来源的酶（大肠杆菌、哺乳动物牛肝脏等）具有不同的活性需要优化温育条件，确保测样时酶解完全。
难点3定量下限低
为了准确定量未知基质样品中化合物的浓度，定量下限需做到pg级（雌二醇与雌酮的定量下限分别为2.000与10.00pg/mL），已报道的检测方法取样量较大，约0.3~0.5 mL血浆量，且需要进行衍生化操作复杂，而复杂的前处理步骤会增加前处理出错机率与实验失败的风险。实验室通过方法优化，采用简单的一步萃取法提取基质中的雌二醇与雌酮，不仅操作简单，无基质效应，且通量高，同时降低了血浆用量。
晶易生物分析实验室检测方法优势
分析方法已成功用于多个项目，ISR合格率≥98%。
一个分析方法检测未结合的雌二醇与雌酮可快速分析大量临床研究样本，且灵敏度高，适用于临床的BE/PK研究。
使用替代基质分析，充分考察替代基质的选择性、稳定性、基质效应和回收率等方面，确保替代基质的适用性。
测样过程中加入酶解质控，确保每批次样本酶解完全。
分析方法简述
图1雌二醇STD1（2.000pg/mL）色谱图、标准曲线图
图2雌酮STD1（10.00pg/mL）色谱图、标准曲线图
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